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cck8實驗步驟介紹(cck8實驗步驟詳細情況如何)

2022-09-03 02:23:54 手機 來源：
導讀 每日小編都會為大家?guī)硪恍┲R類的文章，那么今天小編為大家?guī)淼氖莄ck8實驗步驟方面的消息知識，那么如果各位小伙伴感興趣的話可以，

每日小編都會為大家?guī)硪恍┲R類的文章，那么今天小編為大家?guī)淼氖莄ck8實驗步驟方面的消息知識，那么如果各位小伙伴感興趣的話可以，認真的查閱一下下面的內容哦。

1、一. 制作標準曲線（測定細胞具體數(shù)量）1、首先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量，然后接種細胞到培養(yǎng)板內。2、按照比例（例如：1/2比例）依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3-5個細胞濃度梯度，每個濃度建議3-6個復孔。3、接種后培養(yǎng)2-4小時使細胞貼壁，然后加CCK試劑培養(yǎng)一定時間后測定OD值，制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標（X軸），OD值為縱坐標（Y軸）的標準曲線。根據(jù)此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞的數(shù)量（使用此標準曲線的前提是實驗的條件必須要一致，便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入CCK后的培養(yǎng)時間。）

2、

3、二. 細胞活性檢測1、在96孔板中接種細胞的懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)一段時間（37℃,5% CO2）。2、向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡）3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育1-4小時。

4、

5、4、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。5、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內測定，吸光度并不會發(fā)生改變。

6、

7、三. 細胞增殖-毒性檢測1、在96孔板中配置100μL的細胞懸液。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)24小時（37℃，5% CO2）。2、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測物質。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間（例如：6、12、24或48小時）。

8、

9、4、向每孔加入10μL CCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育1-4小時。6、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。7、若暫時不測定OD值，就可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內測定，吸光度不會發(fā)生變化。

10、

11、總結

12、1.白細胞可能需要培養(yǎng)較長時間。2.當使用標準96孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為1,000 個/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK溶液。3.如果沒有450nm的濾光片，就可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450nm濾光片的檢測靈敏度最高。

本文到此結束，希望對大家有所幫助。

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